1.柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。

　　1.1壓力過高：

　　這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。

　　（1）首先斷開真空泵的入口處，此時，PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果，液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。

　　處理方法：

　　用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查；

　?。?）打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。

　　處理方法：

　　將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI（6.7Bar）以下，過濾白頭正常，再檢查；

　?。?）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

　　處理方法：

　　如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。

　　假如，按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但是，一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以，盡量少用。

　　1.2壓力過低

　　壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏

　　處理方法：

　　尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然，還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。

　　處理方法：

　　打開Purge閥，用3～5mL/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　2.漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。

　　2.1基線漂移

　　一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長，但是，如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　?、僮贤鉄裟芰坎蛔?。

　　解決方法：

　　更換新的紫外燈；

　　②柱溫波動。

　　解決方法：

　　控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　　③流通池被污染或有氣體。

　　解決方法：

　　用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（最好斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

　?、芰鲃酉辔廴?、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。

　　解決方法：

　　檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑。

　?、輼悠分杏袕姳Ａ舻奈镔|(zhì)（高K'值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。

　　解決方法：

　　使用保護柱，如有必要，在進樣之間。在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

　?、迿z測器沒有設定在最大吸收波長處。

　　解決方法：

　　將波長調(diào)整至最大吸收波長處；

　?、吡鲃酉嗟膒H值沒有調(diào)節(jié)好。

　　解決方法：

　　加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值；

　　2.2保留時間漂移

　　保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進行定性，你要考慮以下原因：

　?、贉乜夭划?。

　　解決方法：

　　調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　?、诹鲃酉啾壤兓?。

　　解決方法：

　　檢查四元泵的比例閥是否有故障。

　　③色譜柱沒有平衡。

　　解決方法：

　　在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

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